丹参SmRopGEF1基因的克隆、亚细胞定位与表达分析

目的 克隆丹参SmRopGEF1基因,研究其编码蛋白的亚细胞定位及其对逆境胁迫的应激反应和激素诱导下的表达水平。方法 根据前期丹参转录组测序结果设计SmRopGEF1基因特异引物,利用聚合酶链式反应（PCR）扩增SmRopGEF1基因序列;使用生物信息学方法分析SmRopGEF1蛋白序列特征及进化关系;构建pET28a-SmRopGEF1原核表达载体并转化至大肠埃希氏菌中诱导表达,构建35S启动的SmRopGEF1的绿色荧光蛋白原生质体瞬时表达载体,利用激光共聚焦显微镜观察SmRopGEF1的亚细胞定位;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测逆境胁迫（低温、盐及干旱）和激素诱导（生长素、脱落酸、茉莉酸甲酯）下的基因表达量。结果 丹参SmRopGEF1基因开放阅读框（ORF）全长为1701 bp,编码566个氨基酸,蛋白相对分子质量是62 362.99。生物信息学分析显示SmRopGEF1蛋白含有1个PRONE保守结构域,系统进化树分析表明SmRopGEF1蛋白与芡欧鼠尾草和一串红RopGEF1蛋白为高同源蛋白。成功构建pET28a-SmRopGEF1原核表达载体并在大肠埃希氏菌Rosetta（DE3）菌株中表达、纯化出SmRopGEF1重组蛋白。亚细胞定位的结果显示SmRopGEF1存在于植物细胞的细胞核中。qRT-PCR实验结果表明盐胁迫和冷胁迫能够显著提高SmRopGEF1的表达量;干旱胁迫后丹参愈伤中SmRopGEF1表达量下降。茉莉酸甲酯诱导后SmRopGEF1表达量升高。结论 克隆了丹参SmRopGEF1基因,其在抗逆胁迫中起到重要作用并且可能参与茉莉酸甲酯信号转导。研究结果丰富了丹参防御反应机制的研究,为选育丹参抗逆优良品种、提高丹参的产量与品质提供了参考。     

基于UHPLC Q-Exactive Orbitrap MSn和分子网络技术快速鉴定吴茱萸汤中化学成分

《伤寒论》名方吴茱萸汤是首批《古代经典名方目录》收载品种,全方由吴茱萸、人参、生姜、大枣4味药组成,具有温中补虚、散寒降逆之功,临床应用广泛,疗效显著。经典名方化学组成是其物质基准和量值传递的重要前提,该研究旨在建立高分辨质谱(HR-MS)和分子网络整合的快速分析经典名方吴茱萸汤中化学成分的方法。采用AQUITY UPLC BEH C₁₈色谱柱(2.1 mm×100 mm, 1.7μm),以乙腈-0.1%甲酸水为流动相进行梯度洗脱。分别在正、负离子模式下,采集Q-Exactive Orbitrap MS数据,根据MS/MS碎片模式的相似性创建GNPS分子网络,运用Cytoscape 3.6.1软件筛选结构相似的分子簇,最后根据对照品比对,并结合保留时间信息、高分辨质谱精确相对分子质量和MS/MS碎片信息对吴茱萸汤中化学成分进行快速准确鉴定。在吴茱萸汤中共鉴定出105种化学成分。该研究可为经典名方吴茱萸汤进一步的质量控制、基准物质研究以及药效物质研究等提供参考数据,同时也为中药化学成分的快速定性分析提供借鉴。     

强骨胶囊治疗原发性骨质疏松症临床试验

目的评价强骨胶囊治疗原发性骨质疏松症(肾阳虚证)的临床疗效和安全性.方法采用多中心、双盲双模拟随机对照方法,观察强骨胶囊临床疗效及安全性,其中强骨胶囊试验组162例,骨松宝颗粒对照组93例,其余52例为开放试验组.结果中医证候疗效:试验组总有效率为95.68%,对照组总有效率为80.65%,试验组疗效明显优于对照组(P＜0.01).骨痛疗效:试验组总有效率为94.44%,对照组总有效率为82.80%,试验组疗效明显优于对照组(P＜0.01).双能X线骨密度测定:试验组与对照组用药后腰椎、股骨颈、大转子3个部位的骨密度均有上升,但均与治疗前无显著性差异(P＞0.05).结论强骨胶囊治疗原发性骨质疏松症(肾阳虚证)有效、安全.     

我国主要少数民族医药防治缺血性心脏病研究概述

我国缺血性心脏病发病率逐年增加，给家庭和社会造成了严重的负担，亟待寻找更好的治疗手段和医疗方案。基于象数思维、整体观等思维方式和临床经验，我国主要少数民族医药逐渐发展出独特的理论体系与治疗特色，在防治缺血性心脏病方面具有极大的应用潜力及研究价值。其中藏族医药（以下简称“藏医药”）、蒙古族医药（以下简称“蒙医药”）、傣族医药（以下简称“傣医药”）均可归属于以自然观与生命观为哲学基础的医学系统，各自发展出“三因”“三根”“四塔五蕴”理论，形成了对缺血性心脏病的独特认识并提出了相应的治法治则，产生了以三味檀香散、八味沉香散、肉蔻五味丸、雅叫哈顿散为代表的经典方剂，并具有以广枣、红景天、血竭为代表的特色民族药资源。笔者拟以藏医药、蒙医药为主，归纳民族医药防治缺血性心脏病的相关研究，并探讨开展该类研究所面临的机遇和挑战，以期为民族药防治缺血性心脏病的临床应用及新药开发研究提供参考。     

止消通脉宁干预TGF-β1诱导的HK-2细胞VEGF mRNA的表达

目的:通过观察止消通脉宁药物血清干预转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达,进一步探讨其在防治肾间质纤维化方面的作用。方法:将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养;实验分为6组:空白对照组、单纯TGF-β1诱导组(TGF-β110ng/ml)、空白血清对照组(TGF-β110ng/ml+10%空白血清)、干预1组(TGF-β110ng/ml+10%低剂量止消通脉宁药物血清)、干预2组(TGF-β110ng/ml+10%中剂量止消通脉宁药物血清)、干预3组(TGF-β110ng/ml+10%高剂量止消通脉宁药物血清)。药物干预24h后,荧光定量PCR检测VEGF mRNA的表达。结果:HK-2细胞经TGF-β1诱导后,VEGF mRNA的表达显著上升,与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),经止消通脉宁药物血清干预后,VEGFmRNA的表达逐步下降,与单纯TGF-β1诱导组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:止消通脉宁在一定程度上能够抑制TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞纤维化,其机制的可能与调节纤维化细胞因子VEGF的mRNA表达有关。     

栀子及栀子苷抗炎作用机制的最新研究进展

通过细胞炎症分子、信号通路、免疫系统应答角度总结了近年来栀子及栀子苷抗炎作用的分子机制,旨在为栀子及栀子苷的深入研究及其在医药方面的开发应用提供参考。     

现行中医药人才培养模式研究

本课题以现行中医药人才院校教育、毕业后教育和继续教育的培养模式为研究对象;通过文献调研、问卷调查、座谈调查、专家咨询和数理统计、分析归纳等研究方法;对现行中医药人才培养的主要模式进行了全面地分析总结,并作出科学评价和论述,同时也对其中存在的问题提出了解决对策和建设性意见。     

《辅行诀》抄本寻踪

《辅行诀五脏用药法要》原藏敦煌藏经洞，1908年为法国伯希和盗掠，守洞道士王圆篆在为伯希和装箱时暗藏之，1918年售予河北省威县张僵南，僵南传其嫡孙大昌，毁于1966年“文革”初，“文革”期间张大昌将抄写本寄赠中国中医研究院，中国中医研究院加以整理，于1975年打印35本内部交流（简称“中研本”），继而王雪苔先生两次亲访张大昌，收集到两个抄本，经整理收录于1988年江西科学技术出版社《敦煌古医籍考释》（简称“考释本”）；二十世纪九十年代中国中医研究院中国医史文献研究所派王淑民先生陶广正先生再访张大昌，收集到3个抄本，经整理收录于1998年江苏古籍出版社的《敦煌医药文献辑校》（简称“辑校本”）。今仍有大昌弟子抄本传世。     

中成药治疗非ST段抬高型急性冠脉综合征的网状Meta分析

目的:比较并评价中成药治疗非ST段抬高型急性冠脉综合征的疗效差异和在不同评价指标间的治疗优势。方法:选择中国期刊全文数据库(CNKI)、万方数据库(Wanfang)、维普数据库(VIP)、中国生物医学文献数据库(CBM)、PubMed、Web of Science、Embase等主流医学数据库检索中成药治疗非ST段抬高型急性冠脉综合征随机对照试验,以中医证候积分疗效、心电图疗效、硝酸甘油减停率作为评价指标,并选用GRADEpro软件和Cochrane偏倚风险评估工具进行质量评估,GeMTC和Stata14.0软件进行网状Meta分析。结果:共纳入27篇随机对照试验和22种中成药。网状Meta分析结果显示,心脉通贴散联合芪参益气滴丸和常规西药、解毒通脉胶囊联合常规西药对于中医证候积分疗效较好;心痛舒胶囊联合常规西药对于改善心电图疗效较好;解毒通脉胶囊联合常规西药、养阴活血颗粒联合常规西药对于硝酸甘油减停率效果较好。结论:心脉通贴散、芪参益气滴丸、解毒通脉胶囊、心痛舒胶囊、养阴活血颗粒在非ST段抬高型急性冠脉综合征不同评价指标中具有一定治疗优势,但因受到文献质量限制,今后仍需高质量临床研究提供证据支持。     

双丹明目胶囊治疗糖尿病视网膜病变的多中心临床研究

目的通过Ⅱ、Ⅲ期临床试验观察双丹明日胶囊治疗糖尿病视网膜病变的有效性和安全性。方法采用多中心、随机、盲法、对照,先后开展Ⅱ、Ⅲ期临床试验研究,安全性观察和疗效性观察。疗效性观察包括临床症状和体征,舌象及脉象,视力,视野,眼底,眼底荧光血管造影。以西药导升明作对照,Ⅱ期观察16周、Ⅲ期观察12周为1个疗程。结果双丹明目胶囊对糖尿病视网膜病变总有效率Ⅱ、Ⅲ期分别为97．0％、98．4％,均优于对照药导升明（P〈0．05,P〈0．01）;对中医证候总有效率Ⅱ、Ⅲ期分别为88．1％、91％,均优于对照药导升明（P〈0．01）;能明显改善患者的眼科检查指标,治疗后患者微血管瘤数目,出血、渗出、渗漏、毛细血管无灌注区面积,视野缺损区面积均有明显减少,视力明显提高,中心视野光敏感度有所提高;对患者视物模糊、双日干涩、头晕耳鸣、咽干口燥、五心烦热、腰膝酸软等临床症状均有较好的改善作用和较高的消失率。2组治疗后均有部分病例血、尿常规。肝肾功能,心电图检测功能出现异常,但未证实其与试验药物有因果关系。结论双丹明日胶囊对糖尿病视网膜病变有较好的疗效,且临床使用安全。